correction de Exercice 1 technique chimique pour la biologie

Correction exercice 1 :


1 - Cet exercice met en jeu une chromatographie d'exclusion (encore appelée : tamisage moléculaire, gel filtration, perméation de gel). La connaissance du débit de la colonne (5 ml / min) et des différents temps de rétention nous permet de calculer le volume d'élution pour chaque composé (voir tableau), selon la relation :

Ve (volume d'élution) = d (débit) x tr (temps de rétention)

La représentation graphique du log de la masse moléculaire (log MM) qu'il faut calculer préalablement (voir tableau) en fonction du volume d'élution (Ve) nous donne une droite :

MM log(MM)    tr (min)  Ve(ml) Aldolase 145000 5.16 10.4 52 Lactate déshydrogénase 135000 5.13 11.4 57                   Phosphatase alcaline 8000 4.9 18.4 92                   Ovalbumine 45000 4.65 26.2 131                   Lactoglobuline 37100 4.57 28.6 143 Le fait de visualiser une droite  signifie qu'aucune protéine  n'est exclue du gel. 2 - La glucokinase, avec un temps de  rétention de 21 min, est éluée à un volume d'élution de 5 x 21 = 105 ml. Il suffit de  se reporter au graphe pour déterminer un log de  MM = 4,82 environ, soit une masse moléculaire de  66070 Da  (ou 66070 g/mol ou 66,07 kDa),  environ. Ici, on a tracé le logarithme de  la masse moléculaire  en fonction du volume d'élution : log MM = f (Ve). L'autre représentation serait  de porter le logarithme  de la masse moléculaire en fonction du KAV,  le coefficient de partage entre  la phase liquide et la phase gel :  log MM = f (KAV). KAV = (Ve - Vm) / (Vt - Vm)  Mais pour cela, il faudrait connaître  le volume mort (Vm)  et le volume total de la colonne (Vt).