Correction exercice 2 :
Afin de remplir le tableau, il faut connaître quelques définitions :
- L'activité spécifique (AS) représente un nombre d'unités enzymatiques (UE) par gramme de protéines (g) :
AS = (UE / g)
- Le taux de purification d'une enzyme est le rapport de l'AS mesurée après une étape de purification, sur l'AS mesurée à l'étape précédente :
protéine (g) : | activité (UE) : | AS : | taux de purification | rendement : | |
Extrait brut | 1000 | 20000 | 20 | - | - |
Chromato. d'exclusion | 200 | 14000 | 70 | 3.5 fois | 70 |
Chromato. d'échange d'ions | 15 | 4500 | 300 | 4.28 fois | 32% |
Chromato. d'affinité | 0.5 | 3500 | 7000 | 23.3 fois | 77.7% |
|
Taux de purification = AS après une étape / AS avant cette même étape
- Le rendement correspond à un nombre d'UE mesuré après une étape de purification, sur un nombre d'UE mesuré à l'étape précédente :
Rendement = UE après une étape / UE avant cette même étape
Connaissant ces définitions, on peut remplir le tableau. Il faudra rajouter une colonne supplémentaire "AS" qui nous permettra de calculer le taux de purification :
On pourra utilement calculer :
- Le taux global de purification, qui est égal à l'AS mesurée à la fin de toutes les étapes, divisée par celle de départ. Ici, le taux global de purification est égal à 7000 / 20 = 350.
- Le rendement global qui est égal à 3500 / 20000 = 17,5 %,
Conclusion : Suite aux différentes étapes de purification, on a pu récupérer 3500 unités, sur les 20000 que l'on avait au départ, soit 17,5 %. L'enzyme a été purifiée 350 fois.
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